讲述了一群善良正义的火车侠克服重重困难，最终拯救了世界的故事。
虽然安达桃（千叶纱子 配音）的外表时尚个性奔放，但在内心里，她其实是一个对感情懵懂而转移的好女孩。在小桃的眼里，东寺森一矢（木内秀信 配音）的身影挥之不去，但是，小桃必须好好隐藏对东寺森的感情，因为，小桃的好友柏木沙绘（那须惠 配音）是个专门喜欢抢小桃心爱之物的乖僻女。终于，小桃对东寺森的感情还是暴露了，沙绘立刻就展开了她的破坏行动。 在沙绘的干扰下，小桃和东寺森的感情结束了。正当伤心之时，好友冈安浬（铃村健一 配音）的安慰和陪伴带给了小桃振作的力量，两人的关系也越走越近。这一切都逃不过沙绘的眼睛，新的破坏行动已在酝酿之中。
只因不小心被一只受过放射性感染的蜘蛛咬伤，平凡瘦弱的高中生彼得·本杰明·帕克（尼尔·帕特里克·哈里斯 Neil Patrick Harris 饰）的人生便发生了翻天覆地的变化。从此以后，他穿上红蓝相间的紧身服，戴上面具，凭借发射出的蜘蛛丝穿梭在喧哗闹市的每一个角落。“能力越大，责任越大”，彼得以蜘蛛侠的身份，和破坏城市及世界和平的恶势力作斗争。全新的征程，更强大的敌人，女武士鹿田、The Talon、电王（Ethan Embry 配音）、蜥蜴人（罗布·赞比 Rob Zombie 配音）、银貂（Virginia Madsen 配音）等可怕对手相继登场。蜘蛛侠从不退却，勇敢地迎上前去…… 本片为采用3D技术制作的新版动画。
